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儀器電泳儀凝膠成像儀紫外分光光度計操作流程

   2023-09-07 網絡整理麒麟商城2470
核心提示:純度的測定三方面。0.1.0.5%(w/v)的瓊脂糖膠。6×上樣緩沖溶液均勻,上樣。12-16h。2.溶液樣品進行稀釋,一般稀釋百倍。OD280。稀釋倍數。值。1.的大小。以上。2.1.2.1.值低于上述兩個值。3.0.的稀釋倍數要適當。4.紫外分光光度計法適應濃度較高并且較純的樣品的定量。兩個波長下吸光度比值的大幅度改變。1.樣品進行精確定量。

基因組質量測量方法 1、技術方法 基因組DNA質量測量主要包括三個方面:基因組DNA片段大小測定、基因組DNA含量測定、基因組DNA含量測定。 采用的技術方法為:瓊脂糖凝膠電泳,用紫外分光光度計測定基因組DNA堿液的OD值2、試劑瓊脂糖溴化乙錠(終含量0.5μg/ml)6× lye λDNA堿液(50ng/μl) ) 3.儀器電泳儀凝膠成像儀紫外分光光度計四.操作流程1.瓊脂糖凝膠電泳檢查基因組DNA片段大小,制作0.5%(w/v)瓊脂糖凝膠。 依次取1μl、2μlDNA堿溶液,與6×堿溶液混合,上樣。 同時加入 1 μl 或 2 μl λ DNA 堿液。 1-2V/cm電泳大約需要12-16小時。 2.用紫外分光光度計測定基因組DNA堿溶液的OD值,并將DNA堿溶液樣品稀釋,通常稀釋一百倍。 進行 DNA 稀釋并測量 OD260 和 OD280。 根據=50ng/μl,即50×OD260×稀釋倍數估算基因組DNA mask的含量。 估計 OD260/OD280 值。 五、注意事項 1、λDNA約為48kb,用于表示提取的DNA的大小。 通常要求提取的DNA大小在50kb以上。 2. 純DNA產物的OD260/OD280值為1.8,純RNA產物的OD260/OD280值為2.0。 如果OD260/OD280值低于1.8,則意味著樣品中可能存在RNA污染; 如果樣品中蛋白質或酚污染嚴重,則OD260/OD280值高于上述兩個值。 3、用紫外分光光度計檢測OD值時基因組檢測,讀數應控制在0.01-2之間,即DNA的稀釋倍數要適當。 4、紫外分光光度法適用于含量較高、純度較高的樣品的定量。 核苷酸在260nm處的吸收特別強基因組檢測,只有高水平蛋白質污染的存在才會引起260nm和280nm處吸光度比值的較大變化。 因此,如果A260/A280值高于1.8,則該方法無法準確定量DNA樣本。

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